蛋白质结晶的浓度-蛋白质结晶温度
接下来为大家讲解蛋白质结晶的浓度，以及蛋白质结晶温度涉及的相关信息，愿对你有所帮助。
简述信息一览：
硫酸铵沉淀浓缩蛋白质时浓度怎么计算的呢
1、硫酸铵饱和溶液的配制如下：配置硫酸铵饱和溶液：看你配置多少，温度要求，比如你配置10克20摄氏度的硫酸铵饱和溶液。
2、溶液中的离子强度不同时，不同蛋白质的溶解度不同。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。这种方法称之为盐析。
3、硫酸铵沉淀的蛋白用硫酸铵溶解。根据查询相关资料信息显示，硫酸铵沉淀的蛋白在80%饱和硫酸铵浓度下，会溶解，硫酸铵最大溶解量约为76。
4、灵敏度较高（约 0.1 mg），但较麻烦，也会受 硫酸铵 及 硫醇化合物 的干扰。 步骤中各项试剂的混合，要特别注意均匀澈底，否则会有大误差。④紫外法 280nm光吸收法：利用Tyr在280nm在吸收进行测定。
5、选择合适的有机溶剂浓度。（四）样品的进一步分离纯化 用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。
6、紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。测定范围为1-10mg蛋白质。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。 此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差。
蛋白质浓度测定的标准曲线图
1、蛋白质浓度测定的标准曲线图如下：蛋白质浓度的测定方法有： 双缩脲法：双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。
2、pierc660测蛋白浓度如下：蛋白质Pierce660法标准曲线屏幕，标准曲线以图形显示所选样品的检测标准品、计算的标准曲线，以及检测的吸光度和计算的浓度之间的关系。一条水平线将Y轴上的样品吸光值连接到标准曲线。一条垂直线将该点连接到X轴上的样品吸光值。
3、考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，雍蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250，7%（W/V）乙醇，5%（W/V）H3PO4。
血浆的晶体渗透压为何会比胶体渗透压高?
1、胶体指的是大分子，如Pr（蛋白）。晶体渗透压指的是小分子，如氯化钠、碳酸氢钠、葡萄糖、尿素、氨基酸等。其次，血浆的蛋白含量最高，而蛋白不能自由移动，小分子可以自由移动，血浆与组织液的小分子浓度差不多。这就造成，他们的晶体渗透压差不多，但胶体渗透压血浆比组织液高很多。
2、晶体渗透压影响红细胞内外水的移动。血浆中含有低分子的晶体物质（如氢氧化钠、碳酸氢钠和葡萄糖等）和髙分子的胶体物质（如蛋白质）。血浆的渗透压是这两类物质产生的渗透压总和。低分子晶体物质产生的渗透压称为晶体渗透压，高分子胶体物质产生的渗透压称为胶体渗透压。
3、区别：晶体渗透压的正常值为2*** 。胶体渗透压的正常值为3。晶体渗透压的特点：构成血浆渗透压的主要部分。胶体渗透压的特点：构成血浆渗透压的次要部分。晶体渗透压产生原因：80%来自Na、CL。胶体渗透压的产生原因：自于蛋白质（主要是白蛋白）。
4、血浆渗透压指的是溶质分子通过半透膜的一种吸水力量，其大小取决于溶质颗粒数目的多少，而与溶质的分子量、半径等特性无关。由于血浆中晶体溶质数目远远大于胶体数目，所以血浆渗透压主要由晶体渗透压构成。
怎样计算蛋白质浓度?
所以， 总的蛋白质浓度，也就是一开始的那1毫升里的蛋白质浓度，1777/X=0.001/x=1777/0.001= 12777ug/ml 第二个是对的。
摩尔浓度c=1000*（mg/ml）/MV式中的M为蛋白的摩尔质量。
蛋白质的含氮量是16%，这是一个基本固定值。如果你所指的某匀浆中，不含有其他含氮化合物，则蛋白质浓度为8/16%=50g/L。
估算浓度：如果你知道marker中各个条带的蛋白浓度，你可以通过比较样品条带与与之最接近的marker条带的颜色深浅来估算样品的蛋白浓度。例如，如果一个marker条带的浓度为50 μg，且其颜色深浅与你的样品条带相近，那么你可以估计你的样品条带中的蛋白浓度也大约为50 μg。
先用标准品做标准曲线。。用公式算得曲线的 斜率（r）和截距（b）。。就可以算出浓度了。。
测定蛋白质含量的方法：微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
蛋白结晶
PEG在蛋白结晶中时一种沉淀剂，PEG3350，PEG4000等。蛋白沉淀的时候需要三种溶液，盐溶液，缓冲剂以及沉淀剂。沉淀剂浓度越大，形成的晶核就越多，容易形成许多小的晶体，要是想要的得到大而少的晶体就要降低沉淀剂的浓度，这个是要摸索条件得到的。
可以从以下几个角度进行生物样品的空间蛋白质结晶与分析实验： 生物样品的结晶特性：生物样品的结晶具有很强的随机性和损耗性，因此需要经过一系列的处理、筛选和优化才能得到高质量的结晶。
本身的组成结构。在诸多影响高分子聚合物结晶能力的因素中，既有外界温度、时间与作用力等条件，又有高分子聚合物本身结构的因素。由于分子结构的不同，有能够结晶和不能结晶之分，也有易于结晶和难以结晶之分，还有熔点高低之分。结晶的方法分3种：批量结晶、蒸发扩散结 晶、液/液扩散结晶。
蛋白质在溶液中大多数以规则的球蛋白形式存在，变性后规则的球形变成无规则的线团，互相搅缠在一起，导致 粘度增大和难以结晶。
如何提高纯化蛋白浓度
常用的有下列几种方法：等电点沉淀法不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。盐析法不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。
盐析法：盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中，溶解度会随盐浓度的增高而上升，但当盐浓度增高到一定数值时，使水活度降低，进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和，水化膜逐渐被破坏，最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。
可以加入丙酮等有机溶剂，使蛋白析出，然后离心收集沉淀，沉淀用去离子水再溶解，去离子水量可根据实际需要添加，从而改变蛋白浓度。但该法可能有损蛋白活性。使用透析袋，外侧加聚乙二醇干粉，使水慢慢渗出，该法可维持蛋白活性，但时间较长。
随着His-tag 的问世，让固定化金属离子亲和层析法（Immobilized Metal Affinity Chromatography， IMAC）纯化目标蛋白变为可能，这的确提高了蛋白纯化的效率。
关于蛋白质结晶的浓度，以及蛋白质结晶温度的相关信息分享结束，感谢你的耐心阅读，希望对你有所帮助。
