蛋白质wb-蛋白质WBC
简述信息一览：
用WB能同时检测多种蛋白质,可行吗
1、能够在一张膜上测几种不同蛋白，跟目标蛋白分子量有关。如果各个蛋白之间的条带完全能够分开，抗体特异性强，不存在混淆的问题，则测两到三种蛋白是有可能的。
2、多和200多的分子量能在一块胶上跑wb。根据查询相关***息显示：70多和200多的分子量的蛋白质可以同时在同一块胶上进行西方印迹（Westernblot）分析。这是因为，蛋白质在电泳过程中会受到电场力的作用，根据它们的分子大小和电荷大小而在凝胶中移动的速度不同，从而形成不同的带。
3、可以，方法有两种：一，目的蛋白分子量已知，根据marker显示的分子量范围切膜之后附不同抗体；二，一种目的蛋白显影过后洗膜，再附其它蛋白的抗体。两种情况下都需要不同的目的蛋白之间分子量有一定的差距，如果分子量接近也有其它办法去除已经附上的抗体，重新附新的蛋白抗体。
4、将SDS-PAGE上的蛋白转移到PVDF或nitrocellulose膜上。封闭：使用非特异性的蛋白（如脱脂牛奶或BSA）阻止膜上未结合的部位。主抗体孵育：使用针对目标蛋白的特异性抗体孵育。次抗体孵育：使用对主抗体的二抗孵育，该二抗通常与荧光物质或酶标记。检测：使用化学发光试剂或其他方法检测目标蛋白的信号。
分子量较大的蛋白怎么做wb实验
1、建议用tris-acetate gel+tris-tricine running buffer，这个系统很适合做大分子蛋白的western blot。
2、推荐使用Tris-Acetate 凝胶跑大分子蛋白，会呈现更高的分辨率。凝胶浓度与孔径成反比，即凝胶浓度越小，孔越大，较大分子量的蛋白质更容易通过，所以建议使用6-8％浓度的分离胶，当然也可以使用梯度凝胶。
3、局部蛋白存在剪切位点，有的剪切体具有免疫活性，在WB中也会被检测出。此外有的目的蛋白会存在糖基化位点或其他修饰位点，条带大小可能会远超理论分子量。因而需求查阅文献或是uniprot来得知蛋白的剪切体大小以及修饰位点等。
4、当你成功地将目的蛋白克隆到大肠杆菌或酵母中，需要用Western Blot来验证它的存在。实验过程分为五个步骤，每一步都至关重要：蛋白电泳—分离蛋白家族的神秘力量在SDS-PAGE（十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳）的舞台上，蛋白们根据分子量的大小展开一场速度竞赛。
WB提蛋白是清澈的吗
1、Western Blot，简称WB，是一种不可或缺的蛋白分析技术，通过抗原抗体间的特异性结合，揭示细胞内的蛋白动态。其流程犹如一场精密的接力赛：首先，从组织或细胞中提取出关键的蛋白成分（根据样本大小选择相应的裂解液）/，接着进行定量分析，确保每一步都精确无误。
2、WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上，再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原。与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
3、蛋白质印迹（Western Blotting，WB）：精密分析蛋白质的科学旅程 蛋白质，这些生命活动中的关键分子，其电泳行为受电场、等电点和分子特性影响。通过SDS和还原剂的巧妙运用，我们得以揭示它们的秘密，将变性和非变性电泳技术如PAGE、琼脂糖电泳和等电聚焦电泳推向了蛋白质分析的前沿。
4、WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上，再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原。 与相对应的第一抗体特异性结合，之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合，最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因表达的蛋白成分。
5、blot可以特异性检测某个蛋白质分子，进行定 量，但是不能定位。②两种实验的一抗有时候不能通用，公司的产品说明一般都会说明可以进行什么实验，在免疫组化时，是否适合石蜡切片或者冰冻切片。 5 细胞水平要做western blot，多少细胞提的蛋白够做western blot？ 一般5×106就足够了。
6、0.5mmo/L EDTA 6 20%甘油 7 1mmol/L DTT 8 0.25mmol/L PMSF 9 5ug/ml Aprotinin 10 5ug/ml Pepstatin 11 5ug/ml Leupeptin 或者你可以按照这个配，这个是细胞核裂解液。做法就是，你按顺序提了全蛋白以后把上清弃掉，在沉淀中加入这个核裂解液，震荡然后离心，此时上清就是***白了。
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